HHV-6A w Syncytial Giant-Cell Hepatitis ad 6

Pojedyncza gigantyczna komórka syncytialna od pacjenta jest izolowana bez uszkodzeń otaczających komórek (Panel C), pozostawiając pustą przestrzeń (Panel D). Panel E pokazuje wyniki wykrywania HHV-6 przez PCR w pięciu izolowanych syncytialnych olbrzymich komórkach od pacjenta. Produkt PCR o oczekiwanej długości (306 bp) amplifikowano w dwóch z pięciu syncytialnych gigantycznych komórek. Kontrole pozytywne są reprezentowane przez DNA ze szczepu GS HHV-6A (GS / A), pasażowanego w linii komórkowej HSB-2 i ze szczepu Z29 HHV-6B (Z29 / B), pasażowanego w linii komórkowej Molt3 . W panelu F, trawienie (Dig) specyficznym enzymem restrykcyjnym, Hindlll, wykazuje pasmo 184 bp i jedno ze 122 bp, co wskazuje na obecność HHV-6B w komórkach Molt3, podczas gdy tylko jedno pasmo 306 par zasad, co wskazuje na obecność HHV-6A wykryto w niestrawionym (Undig) DNA z linii komórkowej HSB-2 i w Próbce 5 od pacjenta. MKIX oznacza Marker IX i kontrolę ujemną NC. Identyfikacja wariantów A i B HHV-6 we wszystkich próbkach od dawcy i pacjenta została potwierdzona przez dwa różne testy: specyficzny dla startera test PCR (Figura 3) 13 i analizę restrykcyjną produktu PCR HHV-6 (Figura 4E i 4F) .18 W czasie przeszczepu wykryto DNA HHV-6A (ale nie HHV-6B) w leukocytach krwi obwodowej od dawcy, z obciążeniem wirusem 4500 równoważników genomu (gEq) na mikrogram DNA. W tym samym czasie wykryto DNA HHV-6B (ale nie HHV-6A) w leukocytach krwi obwodowej pacjenta na PCR (Figura 3A). W teście PCR DNA HHV-6A wykryto w osoczu pacjenta przy względnie niskim mianie (20 do 40 genomów na mililitr), zaczynając od dnia pooperacyjnego 16 i utrzymując się na podobnych poziomach aż do szóstego miesiąca po przeszczepie, podczas gdy DNA HHV-6B nigdy nie wykryto w tych samych próbkach osocza (ryc. 1).
PCR, który został przeprowadzony na utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie przekrojach wątroby pokazał DNA HHV-6A (ale nie HHV-6B) w dniu 18 po operacji, wraz z pojawieniem się objawów klinicznych i pojawieniem się histologicznych objawów syncytialnej komórki olbrzymiej zapalenie wątroby, jak również na wszystkich kolejnych próbkach, z wyjątkiem ostatniej, która została zebrana rok po transplantacji, wraz z histologicznym ustąpieniem zapalenia wątroby wielkokomórkowego syncytialnego (Figura 3A). Następujące miano wirusa (na mikrogram DNA) wykryto w próbkach biopsji wątrobowej wątroby pacjenta z histologicznymi objawami syncytialnego zapalenia wielkokomórkowego zapalenia wątroby: dzień 18, 44 000 gEq; dzień 40, 800 gEq; dzień 44, 700 gEq; i dzień 109, 700 gEq. Wirusowy ładunek o wartości 10 gEq na mikrogram lub mniej DNA wykryto w próbce z biopsji wątroby po ustąpieniu syncytialnego zapalenia wielkokomórkowego wirusa w dniu pooperacyjnym 354 (ryc. 1).
Jednokomórkowy PCR, który przeprowadzono na mikromanipulowanych hepatocytach z dużych komórek z próbki z biopsji wątroby w dniu 18, potwierdził obecność DNA HHV-6A na średnim poziomie od 500 do 850 genomów na komórkę, ale nie HHV-6B ani innych wirusy wymienione powyżej. DNA HHV-6A znaleziono tylko w hepatocytach o dużych komórkach, o skuteczności amplifikacji w zakresie od 40 do 50% 14 (Figura 3B i Figura 4A do 4F). DNA HHV-6A nie został wykryty w żadnym z 90 do 100 normalnych niejądrowych hepatocytów, podczas gdy DNA chromosomu Y można było zamplifikować w 10 do 20% tych samych komórek (Figura 3C i 3D).
Badania immunohistochemiczne
Analiza immunohistochemiczna próbki z biopsji wątroby uzyskanej w 18 dniu za pomocą przeciwciała monoklonalnego p41 / 38 przeciwko HHV-6A, wykazała reaktywność cytoplazmatyczną tylko w hepatocytach z komórkami olbrzymimi, potwierdzając ich produktywne zakażenie HHV-6A (Figura 2B)
[patrz też: przychodnia medycyny rodzinnej, poradnia okulistyczna dla dzieci, skrzepy krwi w kale ]

Powiązane tematy z artykułem: poradnia okulistyczna dla dzieci przychodnia medycyny rodzinnej skrzepy krwi w kale